穎泰三號(hào)主要成分是枯草芽孢桿菌及產(chǎn)生的枯草菌肽抗菌肽，枯草菌肽由37個(gè)氨基酸組成，結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)α-螺旋、一個(gè)連接環(huán)和兩個(gè)二硫鍵。其成分明確，結(jié)構(gòu)清晰，可有效殺滅產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌和化膿性鏈球菌等革蘭氏陽性菌。
通過不同方法檢測(cè)穎泰三號(hào)和其他同類芽孢桿菌產(chǎn)品的抑菌性能，評(píng)估不同產(chǎn)品對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌和金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌的抑菌效果，為飼料廠在替代抗生素方面的應(yīng)用提供參考依據(jù)。
試驗(yàn)?zāi)康模?/span>
試驗(yàn)方法：參照藥典方法，分別取0.1mL產(chǎn)氣莢膜梭菌CVCC2027、金黃色葡萄球菌CMCC26003細(xì)菌菌液，加入含10mL LB液體培養(yǎng)基的滅菌試管中，再將制備好的3個(gè)待測(cè)樣品溶液分別按照1%、3%、6%的濃度（0.1mL、0.3mL、0.6mL）加入前述試管中。同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照（試管內(nèi)只加LB液體培養(yǎng)基和細(xì)菌菌液）。
37℃培養(yǎng)，24小時(shí)后測(cè)定各試管菌液OD600nm（用LB培養(yǎng)基調(diào)零），記錄、計(jì)算各產(chǎn)品不同濃度下的抑菌率。
抑菌率=（A空-A樣）/A空*100%
A樣：樣品組24h OD值。
試驗(yàn)結(jié)果如下：
圖1.2 穎泰三號(hào)對(duì)2種細(xì)菌的抑菌效果
圖1.4 進(jìn)口枯草芽孢桿菌對(duì)2種細(xì)菌的抑菌效果
結(jié)論：
試驗(yàn)方法：將3個(gè)樣品益生菌活化，于LB培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)16h，之后將各產(chǎn)品發(fā)酵液離心，取其上清液，用無菌水2倍梯度稀釋依次制備成1/2、1/4、1/8、……、1/256的樣品溶液，備用。
將各細(xì)菌菌液加入到TSC培養(yǎng)基中，之后倒入放有牛津杯的素瓊脂培養(yǎng)皿中，取出牛津杯，吸取150μL不同濃度的各樣品溶液加入到相應(yīng)的孔內(nèi)，同時(shí)設(shè)立滅菌水為空白對(duì)照，并在培養(yǎng)皿上做好標(biāo)記。
將加過樣的培養(yǎng)皿移入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16h，測(cè)量、記錄抑菌圈。
3種產(chǎn)品對(duì)不同產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC：
表2.2 穎泰三號(hào)和其他芽孢桿菌產(chǎn)品對(duì)5種產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC
圖2.2 不同產(chǎn)品對(duì)豬產(chǎn)氣莢膜梭菌1的抑菌圈
圖2.3 不同產(chǎn)品對(duì)豬產(chǎn)氣莢膜梭菌2的抑菌圈
圖2.4 不同產(chǎn)品對(duì)雞產(chǎn)氣莢膜梭菌1的抑菌圈
圖2.5 不同產(chǎn)品對(duì)雞產(chǎn)氣莢膜梭菌2的抑菌圈
結(jié)論：
注：以上數(shù)據(jù)均來自農(nóng)業(yè)農(nóng)村部飼用抗生素替代技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。
撰稿：成鵬、李洪宇
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